Микробиология инфекционных поражений вызванных Chlamydia spp

Хламидиозы – группа антропонозных и зоонозных инфекций, вызываемых хламидиями, характеризующихся острым или хроническим течением с поражением внутренних органов, лимфатических узлов, глаз, суставов и воспалительными гранулематозными процессами на слизистых оболочках.

Возбудители – хламидии, относятся к самостоятельному порядку Chlamydiales семейству Chlamydiaceae, включающему два рода: Chlamydophila и Chlamydia.

Род Chlamydophila включает следующие виды: Chlamydophila pneumoniae и Chlamydophila pssittaci. Род Chlamydia вид Chlamydia
trachomatis, который делится на два биовара. Первый биовар – трахомы и паратрахомы. Он делится на серовары,из которых А, В, Ва, С являются возбудителями трахомы. Серовары от Д до К (генитальные) – причина урогенитального хламидиоза (негонококковый уретрит) и его экстрагенитальных осложнений (болезнь Рейтера). Серовары L₁, L₂, L₃ вызывают венерическую лимфогранулематому.

Широкое распространение хламидийной инфекции обусловлено увеличением количества L-форм и персистентных форм Chlamydia trachomatis, которые устойчивы к противохламидийным антибиотикам. Данная инфекция отличается бессимптомным течением, кроме того, с ней ассоциирован ряд социальных факторов.

Морфология. Chlamydia spp. – Гр(–), кокковидные, неподвижные облигатные внутриклеточные энергетические паразиты. Хламидии полиморфны, что связано с особенностями их репродукции. Они имеют уникальный цикл размножения, заключающийся в чередовании элементарных и ретикулярных телец.

Элементарные тельца – это зрелая форма, которая обладает инфекционностью, она имеет электронноплотный нуклеоид, обеспечивающий устойчивость к факторам внешней среды и действию антибактериальных препаратов. Такая инфекционная частица прикрепляется к поверхности мембраны и путем эндоцитоза проникает в клетку хозяина. Вокруг этой частицы образуется вакуоль. Находясь внутри вакуоли, инфекционная частица увеличивается в размере и превращается в инициальное (ретикулярное тельце), лишенное электронноплотного нуклеоида.

Внутри мембранной вакуоли тельце увеличивается в размере, превращается в промежуточную форму и начинает интенсивно многократно делиться. В результате вся полость вакуоли заполняется большим количеством мелких, вновь образованных при делении частиц. Эти частицы – элементарные тельца – выходят из клетки хозяина и инфицируют другие клетки. Такой цикл развития продолжается до 72 часов.

Существуют персистентные формы хламидий. Эта метаболически неактивная форма устойчива к действию антибиотиков и антител, что позволяет им длительно (годами) находиться в организме. Покоящиеся формы не размножаются и могут долгое время пребывать в стабильно высокой концентрации, а при изменении условий существования быстро реверсировать в исходные ретикулярные формы с последующим преобразованием в элементарные тельца.

Cтроение клеточной стенки хламидий имеет особенности:

• она представляет собой двуслойную мембрану, ограниченную периплазматическим пространством;
• не содержит N-ацетилмурамовой кислоты, которая является основным компонентом пептидогликана;
• ригидность клеточной стенки связана с наличием пептидов, которые перекрестно сшиты пептидными мостиками;
• в состав клеточной стенки входят гликолипиды, аналогичные липополисахаридам наружной мембраны клеточной стенки Гр(–)-бактерий.

Антигенная структура:

• Общий, групповой, родоспецифический антиген, представленный термостабильными липополисахаридами (LPS-эндотоксин).
• Видоспецифический и типоспецифический антигены, позволяющие подразделять хламидии на серовары.
• Основной белок наружной мембраны МОМР (ОМП-1) – это структурный белок, который формирует мембранные поры (порины).
• Общий протеин наружной мембраны (ОМП-2).
• Белок теплового шока хламидий hsp60.

Clamydia sрр. способна переходить в L-формы, что является одним из механизмов развития персистирующей инфекции, которая протекает латентно и сложна в диагностике. Установлено, что патогенез хламидийной инфекции связан с изменениями, происходящими в антигенном составе клеточной стенки возбудителя, а именно с уменьшением на ее поверхности МОМР и LPS и в тоже время увеличением экспрессии hsp60.

Культивирование. Хламидии – это патогенные бактерии, которые являются облигатными внутриклеточными энергетическими паразитами. Они не способны самостоятельно аккумулировать и использовать энергию.

Культивируются хламидии в желточном мешке развивающихся куриных эмбрионов, в организме чувствительных животных и в культурах клеток HeLa, McCoy, Hep2. Оптимальная температура культивирования +35 ⁰С. Это облигатные внутриклеточные паразиты, поэтому на питательных средах они не растут.

Факторы патогенности: белки наружной мембраны, определяющие адгезивные свойства, эндотоксин, белок теплового шока.

Резистентность. Возбудители хламидиозов неустойчивы во внешней среде, чувствительны к действию высокой температуры и быстро погибают при высушивании. При комнатной температуре инфекционная активность возбудителей снижается через 5–7 суток. Низкая температура (–20 ⁰С) способствует длительному сохранению инфекционных свойств возбудителей. Хламидии быстро погибают под воздействием ультрафиолетового облучения.

Методы обнаружения хламидий:

• Микроскопический метод. В основе микроскопического метода лежит обнаружение цитоплазматических включений в клетках эпителия, окрашенных по Романовскому – Гимзе. При этом элементарные тельца хламидий окрашиваются в розовый цвет, а ретикулярные тельца – от голубого до синего. В случае положительного результата, полученного методом микроскопии, необходимо провести культуральное исследование.
• Культуральное исследование. Классическим методом диагностики хламидиоза является культуральное исследование. Для выделения возбудителя используют клетки McCoy, эпителиальные оболочки клеточного мешка куриного эмбриона, клетки HeLa 229, культуры клеток детенышей хомяка ВНК 21.

Преимуществом этого метода является возможность обнаружить живые размножающиеся хламидии. Длительность культивирования варьирует от 4 до 7 дней.

• Прямая иммунофлюоресценция. Для постановки ПИФ используют моноклональные антитела к различным антигенам хламидий:
• основному белковому антигену наружной оболочки хламидий (МОМР);
• липополисахаридному антигену.

Этот метод может быть использован для исследования материала, полученного как инвазивным, так и неинвазивным путем.

• Иммуноферментный анализ. Это прямой метод детекции возбудителя хламидиоза. Преимущество использования ИФА заключается в возможности исследования большого количества образцов, быстроте получения результата.
• Метод молекулярной гибридизации. Преимущества метода заключаются в возможности анализа большого количества клинических образцов, в связи с чем его чаще используют для скрининга, особенно при исследовании клинического материала, полученного неинвазивным путем. Этот метод не требует живого возбудителя, что существенно влияет на результаты анализа.
• Метод амплификации нуклеиновых кислот. При наличии соответствующих тест-систем возможно проводить одновременное определение хламидий и гонококков.
• Серодиагностика. Обнаружение антител имеет ограниченную диагностическую ценность. Для этих анализов используют РСК и РНГА.

Разработаны тест-системы для ИФА с целью обнаружения IgA, IgM, IgG к Clamydiа spp.